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            無外泌體血清的制備步驟及注意事項

            發布時間:2021-08-11 點擊量:876
               無外泌體血清是一種可由多種細胞分泌的直徑為30-150nm的膜性小囊泡。經研究后發現,其內含有獨特的蛋白質與核酸分子,所含成份與其細胞來源密切相關,這也決定了無外泌體血清的功能特異性,如抗原提呈、信號傳導或誘導抗腫瘤免疫反應、細胞遷移、細胞分化、細胞間通信、腫瘤轉移等。目前,無外泌體血清研究已經成為臨床診斷與基礎醫生的新熱點。
              無外泌體血清制備步驟:
              1. 根據需要處理的血清體積選擇合適的轉子與超離管。
              2. 在超凈工作臺,將普通血清置于超離管中,配平后,進行熱封口。
              3. 將封口后的超離管放于離心機轉子中,并加入相應適配器然后擰緊轉頭蓋。
              4. 設置離心程序:4℃,120,000 ×g,離心18小時(也有研究者選擇100,000 ×g離心18小時)。
              5. 離心結束后,回收上清液,為避免污染,在超凈工作臺操作。
              6. 收集得到無外泌體血清,并儲存于-20℃中備用。
              注意事項請注意了:
              1:離心后,血清外泌體會富集在管底和管壁;
              2:吸取血清時,只吸取澄清部分的血清,并且遠離上圖中標記的區域;
              3:吸取70-80%的澄清的血清;(注意:動作慢,動作輕)
              4:其余的渾濁血清留作正常細胞的的營養物添加使用,避免浪費。
              5:如果覺得純度不夠,再把離心后收集的血清做二次超速離心。
              6:針對超速離心后的血清,必須進行粒徑檢測(離心前樣品和離心后樣品),該數據可以放到文章補充材料中,用來證明無血清外泌體制備成功。
             
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